热线电话:010-56545250
  技术服务
分子生物学平台
荧光定量PCR
miRNA荧光定量PCR
长链非编码RNA(lncRNA) 荧光定量PCR
环状RNA(circRNA) 荧光定量PCR
细菌组成、细菌数量检测服务
基因芯片检测(PCR Array)
定点突变
植物亚细胞定位
细菌16S rDNA菌种鉴定
真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定
Southern Blot
载体构建平台
T-载体构建
表达载体构建
植物RNAi载体构建
植物miRNA载体构建
动物siRNA/miRNA载体构建
同源克隆
启动子载体构建
双荧光素酶检测
细胞培养平台
细胞培养、模型建立、功能分析
双荧光素酶检测
免疫检测平台
Western Blot
IP 和Co-IP
GST pull-down
ELISA
蛋白表达纯化平台
原核蛋白表达与纯化
植物蛋白互作验证 BiFC/LCI
高通量测序平台
基础生物信息学分析
微生物多样性/扩增子测序
真核转录组测序
LncRNA 测序
全外显子组测序
 
您当前的位置:首页 > 技术服务 > 免疫检测平台 > Western Blot检测

Western Blot原理介绍

  Western Blot(WB),即蛋白免疫印迹法,是定性、定量检测蛋白表达的一种经典、有效的技术方法。western blot是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。 
  信诺金达提供标准western blot技术服务(您需自备一抗)。并对band进行灰度分析,得出蛋白表达相对定量结果。
Western Blot技术路线
western blot技术路线
Western Blot服务优势
  1. 高分辨率的电泳技术:聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel,PAGE)把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中,达到更高的灵敏度;
  2. 特异敏感的抗原-抗体反应:抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。 ;
  3. 1-5ng中等大小的靶蛋白:可检测到低至1~5ng(最低可到10~100pg)中等大小的靶蛋白。
Western Blot服务要求
  需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液(总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。);或者不少于50mg组织样品,或者不少于5×10的6次方个细胞的细胞样品。

  阳性对照样品(如果有);

  检测目的蛋白的一抗(自备或者如果是常用的信诺金达会有备货,不常用的可由信诺金达订购);

Western Blot步骤
  1、蛋白质抽提 
  A、实验对象为组织样品,取适量(250-500mg)新鲜组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白。 
  B、实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白。 
  2、蛋白质定量
  按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。 
  3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE) 
  将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。 
  4、蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜 
  5、膜的封闭和抗体孵育 
  A、膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
  B、封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。
  C、加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准,室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
  6、结果检测
   化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
  7、数据分析 
   目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。 
  8、提供实验报告
  包括详细的实验方法及Western Blot实验结果。
Western Blot实验交付内容
  实验交付内容包括:蛋白浓度,胶片,膜,以及灰度分析(如果需要)及实验报告。
  实验范例图片:
western blot实验结果 western blot实验结果

western blot实验结果      ; ;  western blot实验结果

服务编号 服务项目 内容说明 价格 周期
SGSPN01 蛋白抽提 总蛋白 ¥80/样品 1周
SGSPN02 核浆蛋白分开 ¥200/样品
SGSPN03 蛋白定量 提供蛋白测定总蛋白浓度 ¥50/样品 1周
SGSPN04 Western Blot预实验 Western Blot 检测一抗体特异性 ¥500/目的蛋白(如做正式实验此项免费) 1周
SGSPN05 Western Blot Western Blot 标准服务(包括蛋白质提取和定量,Tubulin标定,不含一抗) ¥1300/目的蛋白·膜 2-3周#
SGSPN06 SDS-PAGE 客户提供蛋白样品 ¥500/组 1-2周

#:一般状况下,2周即可完成实验。如遇特殊情况,如一抗不好,蛋白浓度低或蛋白特殊像分子量大等,周期会有所延长。

点击 订单下载 发送到info@sinogenesci.com或电话咨询信诺金达技术部。

咨询电话:010-56545250 57421144  QQ:78001304

相关连接:

IP 和Co-IP

GST pull-down

ELISA检测


站点地图 | 收藏本站 | 人才招聘 | 关于我们 | 联系我们
地址:北京昌平区中关村生命科学园北清创意园1-222 电话:010-56545250 邮箱:info@sinogenesci.com 技术支持QQ:78001304 微信:xinnuojinda
© 2010-2019 北京信诺金达生物科技有限公司 版权所有 京ICP备10216372号 京公网安备11010802014978
竞博